Методики проведения иммуноферментного анализа

Иммуноферментный (иммунный) анализ (ИФА) – метод диагностики, широко используемый в диагностики как распространенных, так и редко встречающихся заболеваний. С помощью анализа можно установить этиологию болезни, стадию ее развития, степень опасности для человека. Для проведения диагностики необходимы ИФА-анализаторы и наборы реагентов. Результаты анализа пациент получает в течение 1-2 суток, что позволяет как можно раньше назначить адекватную терапию.

Виды и стадии ИФА

Постановка ИФА подразделяется на прямой и непрямой анализ. В настоящее время в лабораториях чаще используют непрямую методику, так как она дает более точные результаты.

В иммуноферментном анализе выделяют три стадии:

Антигены фиксируются и связываются на поверхности лунки с немеченым антителом. Вначале в лунки вносится биоматериал, затем через 20-30 минут добавляют антитела. Через 1,5-2 часа образуется иммунный комплекс. Не связавшиеся антитела удаляют, используя специальный раствор;
На втором этапе к иммунному комплексу добавляют меченные антитела. В течение 30 минут меченые антитела скрепляются с немечеными и образуется новый комплекс, который состоит из 2-х антител и антигена;
На третьем этапе вносится фермент, в результате происходящей реакции «метка» преобразуется за 5-30 минут в окрашенную субстанцию. Посредством колориметрии вычисляется концентрация окрашенной части. Она всегда будет равна концентрации меченных антител. А их концентрация всегда соответствует содержанию немеченых антител и соответственно концентрации антигенов.

При непрямом ИФА применяется двойной контроль, то есть используется две разновидности антител. Это значительно повышает точность диагностики и чувствительность реакции.
Ферменты как реагенты в ИФА диагностике играют ведущую роль, и к их выбору для лаборатории предъявляется ряд стандартных требований: Основные из них:

Высокая чувствительность и специфичность, позволяющие обнаружить «метку» с самой низкой концентрацией;
Доступность. Лучшие ферментные препараты должны сохранять высокую активность на всем протяжении проведения анализа;
Простота определения концентрации используемого при ИФА фермента.

Преимущества ИФА диагностики

Иммуноферментный анализ ценится за его высокую чувствительность и специфичность. Такая диагностика позволяет максимально точно определить вид возбудителя болезни, его концентрацию, на основании чего делается и вывод о стадии заболеваний.
Чаще всего для исследования необходима сыворотка венозной крови. На анализ также берется спинномозговая жидкость, секрет из цервикального канала и уретры, жидкость стекловидного тела. При необходимости ИФА можно сделать за 1-2 часа.
Наборы для иммуноферментного анализа, в том числе ферменты, антигены, индикаторы, можно приобрести оптом в фирме Интермедика. Компания реализует лабораторное оборудование и реактивы от ведущих зарубежных производителей.